儲(chǔ)存：-20℃

溶解方法：

可用生理鹽水（0.9% NaCl溶液）配制，儲(chǔ)存液參考濃度為1000U/ml，-20℃保存可穩(wěn)定6個(gè)月。 為避免反復(fù)凍融，可分裝凍存。

產(chǎn)品應(yīng)用：

一、凝血實(shí)驗(yàn)

凝血酶（Thrombin）來(lái)源于牛血漿，分子量 37KD，是由兩條肽鏈（31KD 和 6KD）通過(guò)二硫鍵 組成的。凝血酶是凝血酶原（凝血因子 Ⅱ）激活后形成的蛋白質(zhì)水解酶，其催化纖維蛋白原 （fibrinogen）水解掉 A 肽和 B 肽，由此形成纖維蛋白單體，單體進(jìn)一步聚合，在血小板、紅細(xì)胞 和白細(xì)胞等參與下形成血凝塊。

凝血酶酶活：固體活力：50-200 單位/mg solid；比活力：比活力大于 2000 單位/mg protein；

酶活檢測(cè)方法：以纖維蛋白原為底物，按 2010 版藥典凝血酶凍干粉檢測(cè)。

產(chǎn)品穩(wěn)定性好：凍干產(chǎn)品在室溫條件下考察 12 個(gè)月，酶活力未見(jiàn)顯著變化，冷藏條件下保存 36 個(gè)月，酶活力未見(jiàn)顯著變化。

二、標(biāo)簽切割

由于凝血酶具有切割序列專(zhuān)一性強(qiáng)，水解效率高的特點(diǎn)，它也被廣泛地應(yīng)用于基因工程產(chǎn)品的 開(kāi)發(fā)，其應(yīng)用之一是作為工具蛋白酶用于重組融合蛋白質(zhì)的特異性斷裂，尤其適用于生物工程制藥 業(yè)及基因工程、生物化學(xué)、分子生物學(xué)等研究。

凝血酶是一種廣泛用于切割標(biāo)簽的蛋白酶，凝血酶最佳切割位點(diǎn)是 X4-X3-P-R[K]-X1'-X2',這里 X4 和 X3 是疏水氨基酸而 X1'和 X2'是非酸性氨基酸，一些經(jīng)常使用的識(shí)別位點(diǎn)是 L-V-P-R-G-S,L-V-P-R-G-F,和 M-Y-P-R-G-N。在 X4-X3-P-R-G-X2'之間切割比在 X4-X3-P-K-L-X2'更 有效。其他識(shí)別位點(diǎn)是 X2-R[K]-X1', 這里 X2 或者 X1'是甘氨酸，例如 A-R-G 和 G-K-A，這里切 割發(fā)生在第二個(gè)殘基后。在凝血酶切割位點(diǎn)和 N 末端標(biāo)簽之間插入五個(gè)甘氨酸殘基可改善切，通過(guò) 這一"甘氨酸連接肽"只需較少酶量就可達(dá)到完全切割，而且也可以避免可能發(fā)生的錯(cuò)誤切割。

作為切割標(biāo)簽的蛋白酶具有以下特點(diǎn)：

1. 純度高：SDS-PAGE 檢測(cè)圖譜無(wú)雜蛋白條帶；

2. 不含有其他蛋白酶活性；

3. 酶切活性高，能夠有效切質(zhì)量比為 1:1000 的蛋白。切割可在 20℃到 37℃之間切割 0.3 到 16 小 時(shí)。

4. 有效的酶切緩沖液是 20mM Tris-HCl 緩沖液,含 150mM 氯化鈉，pH8.0。

5. 凝血酶可從切割產(chǎn)物中用 p-氨基瓊脂糖親和純化,或者苯甲脒瓊脂糖移去。

酶切條件：凝血酶酶切條件舉例：20mM Tris-HCl緩沖液，含150mM NaCl，pH8.0體系中：

融合蛋白總量 100μg

凝血酶用量 0.2-0.3U

溫度 20℃-37℃

酶切時(shí)間 0.3h-16h

根據(jù)底物蛋白酶切位點(diǎn)的差異，可以適當(dāng)調(diào)整凝血酶的工作濃度與酶切時(shí)間，以便達(dá)到較好的 酶切效果。

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